Cells

02 \ 细胞收集指南

代谢组

1. 贴壁细胞（1*10⁷ cell/sample）

1.1. 除培养液；

1.2. 迅速加入5mL 预冷 PBS（pH 7.4）快速漂洗，去除 PBS；

1.3. 重复步骤1.2一次（一定要将 PBS 去除干净，越快越好）；

1.4. 加入适量胰蛋白酶溶液，孵育消化细胞，重悬细胞并转移至 50mL 离心管中；

1.5. 加入 6mL 淬灭试剂手动轻轻摇匀 10s；

1.6. -9℃，2500g，转子-24℃预冷，离心 5min（如果离心机实际情况达不到-9℃，可 以更改成其他温度，但一定要低于4℃。转子在冰箱冷冻层预冷即可。本步骤的目 的是将细胞沉淀下来）；

1.7. 快速去除上清，保留细胞沉淀；

1.8. 将装有细胞沉淀的离心管迅速扣紧盖子，迅速放入液氮中速冻（≥10min）；

1.9. 然后转移至-80℃保存。

2. 悬浮细胞（1*10⁷ cell/sample）

2.1. 进行细胞计数，计算出1*10⁷个细胞所需要的体积（该体积为1体积，也就是说1体积 细胞悬浮液中含有1*10⁷个细胞）；

2.2. 取5体积的淬灭试剂至合适大小的离心管；

2.3. 将盛有淬灭试剂的离心管插在干冰中预冷，用超低温温度计（量程：-100 ~ +40℃， 淘宝京东有售）进行温度测定，温度控制在-40℃；

2.4. 迅速从培养基中取出1体积的细胞悬浊液，加入到淬灭试剂中；

2.5. 手动轻轻混匀 10s；

2.6. 4℃，1000g，离心1min（沉淀细胞，离心力不宜过大，防止细胞破碎）；

2.7. 去除上清，保留细胞沉淀（沿管壁吸除上清，尽量地去除干净液体）；

2.8. 放到液氮中浸泡≥10min速冻后放入-80℃冰箱保存。

3. 淬灭剂配方

3.1. 用 Milli-Q 超纯水配制0.85%的 AMBIC 溶液（85g/L）；

3.2. 取出 100mLAMBIC 溶液与 600mL 甲醇、290mLMilli-Q超纯水混合；

3.3. 搅拌均匀后用 12M 盐酸调 pH 至7.4；

3.4. 最后用 Milli-Q 超纯水定容至 1L 即可。