
Cells
02 \ 细胞收集指南
基因组
一、甲基化测序
- 1. 胰酶消化(悬浮细胞无需消化)并收集约1x106以上细胞(60mm培养皿或T25培 养瓶),转移到1.5ml离心管中;
- 2. 1300g离心5min,去上清;
- 3. PBS 轻轻吹打清洗一次。1300g 离心5min,去上清;
- 4. 放入-80℃冰箱中保存。
二、全基因组测序
- 1. 胰酶消化(悬浮细胞无需消化)并收集约1x106以上细胞(60mm培养皿或T25培 养瓶),转移到1.5ml离心管中;
- 2. 1300g 离心 5min,去上清;
- 3. PBS 轻轻吹打清洗一次。1300g 离心 5min,去上清;
- 4. 放入-80℃冰箱中保存。
三、全外显子组测序
- 1. 胰酶消化(悬浮细胞无需消化)并收集约 1x106 以上细胞(60mm培养皿或T25培 养瓶),转移到 1.5ml离心管中;
- 2. 1300g 离心 5min,去上清;
- 3. PBS 轻轻吹打清洗一次。1300g 离心 5min,去上清;
- 4. 放入-80℃冰箱中保存。
四、CHIP-seq/qPCR
- 提供1E7-2E7细胞
- 送样方式1(贴壁&悬浮细胞):
- 细胞培养结束后,培养瓶进灌装满培养基,常温寄送(上海区域)
- 送样方式2(贴壁细胞):
- 1.将甲醛直接滴加到培养基中至终浓度为0.75%并在室温(RT)下轻轻旋转10分钟,将蛋白质与DNA交联。
- 2.将甘氨酸加至培养基中终浓度为125mM,并在室温下振荡孵育5分钟,去上清
- 3.用10mL冷PBS冲洗细胞两次。
- 4.加入5 mL冷PBS,用细胞刮刀彻底刮去培养皿,转移到50 mL试管中。
- 5.向培养皿中加入3mL PBS,再次刮擦并将剩余的细胞转移至50mL管中。
- 6.离心5分钟,4℃,1,000×g,去上清,细胞沉淀液氮速冻,-80度保存,干冰寄送
- 送样方式3(悬浮细胞):
- 1.将甲醛直接滴加到培养基中至终浓度为0.75%并在室温(RT)下轻轻旋转10分钟,将蛋白质与DNA交联。
- 2.将甘氨酸加至培养基中终浓度为125mM,并在室温下振荡孵育5分钟,1000xg 5min离心去上清
- 3.用10mL冷PBS冲洗细胞三次,1000xg 5min离心去上清
- 4.细胞沉淀液氮速冻,-80度保存,干冰寄送