Blood
03 \ 血液收集指南
血浆
一、基因组
- 1. 甲基化测序(RRBS、BSAS）
- 1.1. 采集外周血，迅速转入 EDTA 或枸橼酸钠抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 1.2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g离心 10 分钟；
- 1.3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心 10 分钟，小心吸取上清到冻存 管中（≥ 2 mL/sample）；
- 1.4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
- 2. 全基因组测序
- 2.1. 采集外周血，迅速转入 EDTA 或枸橼酸钠抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 2.2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g 离心 10 分钟；
- 2.3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心 10 分钟，小心吸取上清到冻存 管中（≥ 2 mL/sample）；
- 2.4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
- 3. 全外显子组测序
- 3.1. 采集外周血，迅速转入 EDTA 或枸橼酸钠抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 3.2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g 离心 10 分钟；
- 3.3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心 10 分钟，小心吸取上清到冻存 管中（≥ 2 mL/sample）；
- 3.4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
二、转录组
- 1. 采集外周血，迅速转入 EDTA 抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g 离心 10 分钟；
- 3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心 10 分钟，小心吸取上清到冻存管 中；
- 4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
三、蛋白组
- 1. TMT
- 1.1. 采集外周血，迅速转入抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 1.2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g 离心 10分钟；
- 1.3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心 10 分钟，小心吸取上清到冻存 管中（0.1-1ml/sample）；
- 1.4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
- 2. Label free
- 2.1. 采集外周血，迅速转入抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 2.2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g 离心 10 分钟；
- 2.3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心10分钟，小心吸取上清到冻存 管中（50-500ul/sample）；
- 2.4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
- 3. 磷酸化蛋白组学
- 3.1. 采集外周血，迅速转入抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 3.2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g 离心 10 分钟；
- 3.3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心 10 分钟，小心吸取上清到冻存 管中（0.2-2ml/sample）；
- 3.4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
- 4. 糖基化蛋白组学
- 4.1. 采集外周血，迅速转入抗凝管中，涡旋或用移液器 Tip 混匀；
- 4.2. 在 1 小时（室温条件下）或 2 小时(4℃条件下)内进行以下操作：4℃，820g 离心 10 分钟；
- 4.3. 吸取上清转至洁净的离心管中，16,000g, 4℃,离心 10 分钟，小心吸取上清到冻存 管中（0.5-5ml/sample）；
- 4.4. 液氮速冻后放入-80℃冰箱中保存。
四、代谢组
- 1. 使用肝素钠抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离；
- 2. 1300g 室温离心 10 分钟；
- 3. 取上层至冻存管中，液氮速冻后-80℃冰箱保存（ NMR 实验 500ul/sample，GC-MS， LC-MS 实验 200ul/sample）；
- 提示点：
- 1）代谢组学实验检测推荐使用肝素钠抗凝管，柠檬酸是 TCA 循环中的重要物质， 使用柠檬酸钠抗凝剂的话会引入外源污染。而 EDTA 会影响 NMR 采谱。但肝素钠会 对 RNA 相关实验有负面作用，主要是因为会抑制反转录酶活性。请根据自身具体情 况选用合适的抗凝管；
- 2）血浆参考产率：≈ 50%（例如：1mL 全血大约能得 0.5mL 血浆）。
五、蛋白芯片
- 样品量要求：200ul/sample。注意：一定避免反复冻融。
- 样本收集步骤：
- 应使用EDTA抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：3000rpm室温离心10分钟，取上层，0.2mL/管分装至1.5mL离心管中。-80度冻存。足量干冰寄送。
- 注意事项：
- 1）血浆参考产率：≈50%（例如：1mL全血大约能得0.5mL血浆）