利用RNAi技术、过表达技术或CRISPR/Cas9技术，将相应的目的序列构建为重组质粒或慢病毒等基因操作工具，再将这些工具导入细胞，即可对细胞中特定基因的表达进行下调、上调或基因编辑。经过基因操作后的细胞可进行一系列的细胞表型检测以研究基因功能，也可通过筛选及单克隆化等步骤构建相应的稳定细胞株用于进一步研究。
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RNA干扰（Knock Down） |
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实验目的 |
实验技术 |
周期（工作日） |
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制备shRNA慢病毒 |
用于下调基因表达的慢病毒包装 |
20 |
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基因表达下调操作 |
shRNA慢病毒感染细胞及目的基因表达检测（qPCR/WB） |
20 |
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构建基因表达下调稳定细胞株 |
单克隆细胞筛选、扩培及目的基因表达检测（qPCR/WB） |
30-40 |
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过表达（Overexpression） |
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实验目的 |
实验技术 |
周期（工作日） |
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制备基因过表达慢病毒 |
用于上调基因表达的慢病毒包装 |
20 |
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基因上调表达操作 |
过表达慢病毒感染细胞及目的基因表达检测（qPCR/WB/FACS） |
20 |
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构建基因上调表达稳定细胞株 |
单克隆细胞筛选、扩培及目的基因表达检测（qPCR/WB/FACS） |
30-40 |
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CRISPR/Cas9 system KO/KI |
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实验目的 |
实验技术 |
周期（工作日） |
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基因编辑操作 |
Cas9/gRNA RNP电转入细胞，混合克隆细胞基因编辑效率检测： KO：sanger测序/WB HiBiT KI：sanger测序/HiBiT detection |
20 |
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构建KO/KI稳定细胞株 |
单克隆细胞筛选、扩培及基因编辑效率检测 |
30-40 |
备注：以上周期不包含实验材料准备及预实验所用周期
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