• 如何避免组内差异过大的现象?

    组内差异大主要表现组内老鼠有的就长不出来肿瘤,有的长得很大。一种很小的可能是接种悬液未摇匀;第二种可能是个体差异:老鼠年龄是一个很大的因素,建议控制好试验条件,动物周龄在5-6左右,体重均一,健康状态一致。

  • 为什么裸鼠皮下注射肿瘤细胞开始成瘤,可见隆起,后来又消失了呢?

    这种情况其实还是没有成瘤。成瘤过程一般是细胞注射后有圆形小包,然后很快消失,再隆起(一般是组织液),再变小变红(血管生成),最后肿瘤快速生长。因此没有成瘤只是第二阶段,建议调整一下细胞注射量、更换实验鼠或添加一些促进细胞生长的因子试试。

  • 成瘤大概需要多久?

    正常一般4周可以达到0.8-1cm肿瘤体积,但是具体成瘤周期需要依据细胞成瘤能力的强弱和细胞接种量。

  • 成瘤率很低怎么办?

    如果成瘤率太低,可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率,即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上,成瘤后再取出接种新鼠,如此传几代,肿瘤性质稳定后,再将肿瘤取出,剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。

  • 如何选择接种部位?接种深浅是否有影响?

    按照实验要求选择接种部位,基本是腋下和背部。但接种部位一般不前腋下,这里血管丰富,易成活;接种于皮下,太浅则因血管少而不易成瘤,太深会在肿瘤长大后与周围的肌肉、结缔组织等相粘连,让你不能很好地分清肿瘤与侵犯的组织,特别是不易观察肿瘤的生长情况。

    腋窝中部外侧皮下为好。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针,要保证与接种点的距离小于针头的长度,向头部方穿行,绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层,当针头到达接种位点时注射,退出针头,这样操作的目的主要是避免污染,进针点还有少量污染的可能性的,针头在皮下穿行一段后,接种点离进针点较远,最大限度减少污染的可能。

  • 为何待接种细胞用无血清培养基或者PBS悬浮?

    因为培养液、血清等可能会导致动物的炎症反应而影响肿瘤的发生发展。

  • 如何选择裸鼠进行皮下成瘤实验?性别是否有影响?

    目前裸小鼠是应用最广的皮下成瘤模型。一般取5-6周龄裸鼠饲养(此时大小约16-23g)。雌雄都可以,和性别有关的实验除外。但有些肿瘤在雌性中生长不如雄性的好,比如在肝癌HCC,雌激素会与NF-kB或/和C/EBPbeta等interleukin-6的转录因子直接结合并减弱其活性,从而影响IL-6的转录及其下游诱导(促进)癌进展,从而保护机体。因此目前大多数实验倾向使用雄性裸鼠。

  • 发现切片后的背景很高、或者出现许多异常明亮的亮点?

    背景很高的原因主要是组织太干,一方面可能是由于在多聚甲醛中浸泡的时间太久,另一方面可能是由于切片后组织晾的太干燥,一些背景可以通过适当的图片的后期处理解决。明亮的亮点可能是PBS没有过滤就用来洗片子,里面有杂质,或者是镜头上面的杂质,有些亮点可能也与组织本身的结构有关。

  • 冰冻切片发现组织碎片很多、或者切片发现组织有洞?

    首先,可能是组织在处理的时候,在多聚甲醛中浸泡的时间过长,或者是组织在处理过程中没有全程在PBS中浸泡,还可能是组织在-80 °C冰箱中贮存的时间太久,这些原因都会使组织变脆,变干,缩小,产生空洞。其次,可能组织没有在切片前复温30 min,组织冻的太硬,会使切片产生碎片。

  • 脑部注射时,如何提高病毒的感染范围和感染效果?

    建议参照解剖图谱,尝试多位点注射。

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