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A: 1.切片过于陈旧，使用新鲜的切片；如果需要进行保存，保存在4°C；
2.玻片上的组织已干化重新补充水分并在染色过程中保持组织被覆盖在缓冲液中；
3.抗原表达太少，可更换效价比更高的抗体。
A: 1. 洗涤不充分,由于固定剂的残留而导致高的背景值，应确保在步骤之间用PBS至少洗3次；
2. 固定不充分可能会导致抗原在组织中的扩散，可降低固定后时间；
3. 弥散染色，常由组织损伤导致，小心制备组织样品以避免组织损伤；
4. 检测试剂的渗透不充分，制备更薄的切片;
5. 不同固定剂对于组织抗原影响各异，可优化pH，孵育时间和温度。
