AAV相比于其他病毒载体的优势:
a. 表达时间长: 绝大多数重组rAAV 不会整合到基因组上,而是在宿主细胞中串联形成附加体(episome)存在于细胞核中 ,细胞在细胞复制和分裂后会丢失附加体,并因此失去基因表达能力,rAAV在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达6个月以上;
b. 扩散性强: rAAV 的体积小,滴度高,因此具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性,可以穿透血脑屏障,是理想的神经元和胶质细胞感染工具;
c. 特异性强: rAAV 有十数种常用的血清型,不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力,是动物实验首选;
d. 安全性高: 目前还没有发现AAV 对人体致病,是美国FDA 批准的可以直接用于人体基因治疗的最安全的病毒载体;
e. 免疫原性低: 当AAV 用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时,不易造成免疫反应;
f. 高稳定性: rAAV 病毒在4℃可以保存1 周,并且对氯仿等试剂具有抗性。
病毒表达系统 |
腺相关病毒 (Adeno-Associate virus) |
慢病毒 (Lentivirus) |
腺病毒 (Adenovirus) |
病毒基因组 | 单链DNA病毒 | RNA病毒 | 双链DNA病毒 |
复制 | 条件复制 | 不可复制 | 条件复制 |
滴度 | 最高可达1012-13v.g/ml | 最高可达109TU/ml | 最高可达1012pfu/ml |
感染细胞类型 | 感染分裂不旺盛的细胞 | 感染分裂和不分裂细胞 | 感染分裂和不分裂细胞 |
表达丰度 | 高水平表达 | 中到高水平表达 | 高水平表达 |
表达时间 | 1-2周 | 慢(2-4天) | 快(1-2天) |
持续表达时间 |
病毒基因组游离于宿主基因组外, 在分裂不旺盛的细胞中可长时间表达 |
病毒基因组整台于宿主基因组, 长时间、稳定表达外源基因 |
病毒基因组游离于宿主基因组外, 瞬时表达外源基因 |
克隆容量 | 适合表达小于2.8kb的外源片段 | 适合表达小于4kb的外源片段 | 适合表达小于5kb的外源片段 |
免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 | 较高免疫原性 |
安全性 |
暂无发现致病性, 已通过欧盟和FDA许可, 用作基因治疗药物的载体 |
暂无发现致病性, 已被用于CAR-T治疗作用于人体 |
可能会引起一些咳嗽流涕 |
根据衣壳蛋白的差异,目前AAV可分为12种血清型(AAV-1~AAV-12)和100多种变异体。不同的AAV 具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性,因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别,这也导致不同血清型转染的细胞类型和感染效率也各不相同,那么如何选择合适的血清型呢,首先我们需要了解下AAV 不同血清型的组织趋向性。
血清型 | 简介 |
1 | 顺行示踪跨单突触。适合神经等方向的研究 |
2 | 胞外吸附分子为硫酸乙酰肝素蛋白多糖,适合于神经等方向的研究 |
5 | 胞外吸附分子为N-唾液酸,适合肺、眼睛、神经等 |
6 | 适合血液细胞,比如T细胞 |
8 | 适合肝脏,受体为LamR |
9 | 最广谱的血清型,感染全身效果极好,可以穿过血脑屏障、眙盘屏障 |
DJ | 适合体外实验、细胞 |
DJ/8 | 适合肝脏,眼,中枢神经,肌肉 |
PHP.eB | 基于PHP.B,加强版,更适合中枢神经系统 |
PHP.B | 在神经元和神经胶质中感染效率超高,大约是9型的40倍。 |
PHP.S | 能够感染外周神经元 |
Retro | 逆向标记血清型 |
吉凯为您总结不同部位适合的血清型,供您参考。
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1 | 2 | 5 | 6 | 8 | 9 | DJ | PHP.eB | PHP.S | Retro |
心脏 | √ |
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肝脏 |
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肺 |
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胰腺 |
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骨骼肌 | √ | √ |
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神经 | √ | √ | √ |
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眼部 |
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吉凯小建议:
1. 如您不确定选择哪种血清型,可尝试使用感染谱最广的9型。
2. 如初次使用AAV,可使用AAV彩虹装进行预实验,通过彩虹装比较不同血清型对目标组织的感染效果,摸索最佳的注射方法、注射位点、病毒用量等,以便得到更理想的实验结果。
AAV彩虹装
AAV彩虹装是吉凯基因通过查询相关文献,将适合不同组织的常用血清型组合而成的套装产品。点击购买AAV彩虹装>>
彩虹装 | 血清型 | 提供量 |
眼/其他器官 | 1/2/5/6/8/9/DJ | 10μL/种血清型 |
神经系统 | 1/9/Retro/PHP. eB | 10μL/种血清型 |
肝脏/肾脏 | 2/8/9/DJ | 100μL/种血清型 |
心脏/血管/肌肉 | 1/6/8/9 | 100μL/种血清型 |
*各血清型在神经系统研究中作用:1型,可作为顺行示踪跨单突触标记的血清型使用 ;9型,可作为顺行示踪非跨突触标记的血清型使用;Retro,可作为逆向示踪非跨突触标记的血清型使用; PHP.eB,适合中枢神经系统,可穿过血脑屏障、胎盘屏障,常通过尾静脉注射使用 。
吉凯提供多种AAV载体,可通过过表达、RNAi等技术操作编码基因和非编码基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。点击查看载体图谱>>
调控方式 | 载体编号 | 元件顺序 | 载体容量(bp) | 荧光 |
荧光是否 融合表达 |
过表达 | GV388 | CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE -hGH polyA | 1207 |
EGFP |
融合 |
GV389 | CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA | 1207 | mCherry | 融合 | |
GV410 | CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP | 1130 | EGFP | 非融合 | |
GV411 | CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA | 2819 |
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GV461 | CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA | 2890 |
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GV467 | CMV- betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA | 2095 | EGFP | 融合 | |
GV489 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA | 1285 | EGFP | 融合 | |
GV466 | hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA | 2186 | EGFP | 融合 | |
GV475 | hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA | 2186 | mCherry | 融合 | |
GV488 | gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA | 1591 | EGFP | 融合 | |
干扰 | GV478 | U6-MCS-CAG-EGFP |
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EGFP | 非融合 |
GV480 | U6-MCS-CAG-mCherry |
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mCherry | 非融合 | |
miRNA-up | GV412 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA |
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EGFP | 非融合 |
GV413 | CMV bGlobin-mCherry-MCS -WPRE-hGH polyA |
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mCherry | 非融合 | |
miRNA-down | GV479 | U6-MCS-CAG-EGFP |
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EGFP | 非融合 |
GV480 | U6-MCS-CAG-mCherry |
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mCherry | 非融合 |
1. AAV 在神经系统中的应用
代表文献 吉凯客户文章Molecular Psychiatry,(2017)00,1-13
文献来源:Gene deficiency and pharmacological inhibition of caspase-1 confers resilience to chronic social defeat stress via regulating the stability of surface AMPARs.
代表文献 吉凯客户文章Neuropharmacology, 128(2018) 207-220.
文献来源:Inhibition of Cdk5 rejuvenates inhibitory circuits and restores experience-dependent plasticity in adult visual cortex.
2. AAV在眼科中的应用
代表文献 Science,2010,329(5990):413
文献来源:Genetic reactivation of cone photoreceptors restores visual responses in retinitis pigmentosa.
3. AAV 在肝脏中的应用
代表文献 吉凯客户文章Cellular physiology and biochemistry,2016,40(5):1117
文献来源:Mesenchymal stem cells with enhanced Bcl-2 expression promote liver recovery in a rat model of hepatic cirrhosis.
4. AAV 在脂肪中的应用
代表文献 吉凯客户文章Jci Insight,2017,2(4):e89044
文献来源:Switching harmful visceral fat to beneficial energy combustion improves metabolic dysfunctions.