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基因操作工具制备

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腺病毒

腺病毒(Adenovirus)是一种线性双链DNA无包膜病毒,对分裂期细胞和非分裂期细胞均具有感染能力,且具有嗜上皮细胞性。重组腺病毒载体是以腺病毒为基础发展起来的工具病毒载体,它可通过受体介导的内吞作用进入细胞内,但腺病毒基因组不整合进入宿主细胞基因组中。腺病毒作为一种常用的基因操作工具,在心血管领域肝脏、肌肉、、肿瘤及其他领域广泛应用。

优势

腺病毒与其他病毒工具比较,具有以下优势:

a. 是研究原代非增殖细胞基因表达的最佳系统:腺病毒感染细胞后,1-2 天即可表达,是研究原代非增殖细胞基因表达的最佳系统;

b. 滴度高:腺病毒系统在转有 E1 基因的 HEK293 细胞中可进行自我复制,可产生滴度为1010 到1011PFU/mL 的病毒;

c. 载体容量大: 可容纳不超过5kb 的片段;

d. 不整合到染色体中,无插入致突变性:腺病毒除卵细胞以外,几乎在所有已知细胞中都不整合到染色体中,因此避免了因整合而引发的潜在的基因突变和随机效应 。

病毒表达系统 腺病毒
(Adenovirus)
慢病毒
(Lentivirus)
腺相关病毒
(Adeno-As sociate virus)
病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 单链DNA病毒
复制 条件复制 不可复制 条件复制
滴度 最高可达1012pfu/ml 最高可达109TU/ml 最高可达1012-13v.g/ml
感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞 感染分裂和不分裂细胞 感染分裂不旺盛的细胞
表达丰度 高水平表达 中到高水平表达 高水平表达
表达时间 快(1-2天) 慢(2-4天) 1-2周
持续表达时间 病毒基因组游离于宿主基因组外,
瞬时表达外源基因
病毒基因组整台于宿主基因组,
长时间、稳定表达外源基因
病毒基因组游离于宿主基因组外,
在分裂旺盛的细胞中可长时间表达
克隆容量 适合表达小于5kb的外源片段 适合表达小于4kb的外源片段 适合表达小于2.8kb的外源片段
免疫原性 较高免疫原性 低免疫原性 低免疫原性
安全性 可能会引起一些咳嗽流涕 暂无发现致病性,
已被用于CAR-T治疗作用于人体
暂无发现致病性,
已通过欧盟和FDA许可,
用作基因治疗药物的载体

包装服务


质量检测


科研-细胞级 科研-动物级
产品特点 可快速获得的纯病毒 纯度和滴度较高,滴度达1E+10PFU/m以上,
可用于动物实验
适用范围 适用于永生化细胞系,或作为病毒扩增毒种 适用于在难以转染的细胞中表达特定基因,
也可用于动物实验
质量标准 滴度≥1E+9 PFU/ml
微生物检测阴性
滴度≥1E+10 PFU/ml
复制性腺病毒水平<1 RCA/3.0×10^10VP
病毒感染滴度/病毒颗粒数(IUVP) > 3.3%
质粒DNA残留≤4E+8 copy/ml
宿主DNA残留≤10 μg/ml
微生物检测阴性

想要了解吉凯基因腺病毒包装完整流程 >>

载体选择

吉凯提供完善的腺病毒产品体系,用于操作编码基因和非编码基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。以下腺病毒载体可供您选择,点击查看载体图谱>>


调控方式 载体编号 元件顺序 原核抗性 真核抗性 荧光标记
启动子
RNAi/过表达
启动子
荧光标记
过表达 GV345 CMV-MCS-3FLAG-SV40-Cherry Ampicillin SV40 CMV Cherry
GV314 CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP Ampicillin SV40 CMV GFP
干扰 GV119 hU6-MCS-CMV-EGFP Ampicillin CMV U6 GFP
miRNA-up GV202 hU6-MCS-CMV-EGFP Ampicillin CMV U6 GFP
GV317 CMV-MCS-SV40-EGFP Ampicillin SV40 CMV GFP
miRNA-down GV201 hU6-MCS-CMV-EGFP Ampicillin CMV U6 GFP

应用案例

1. 细胞感染

腺病毒可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。


了解腺病毒细胞感染操作请点击这里>>




2. 在体注射
2.1 神经系统

表文吉凯客户文章Brain Behavior and Immunity,2017.

文献来源:The long non-coding RNA Neat1 is an important mediator of the therapeutic effect of bexarotene on traumatic brain injury in mice.




2.2 心脏

代表文献 吉凯客户文章 Cardiovascular research, 2014, 102(1): 46-55.


文献来源:Silencing of Pellino1 improves postinfarct cardiac dysfunction and attenuates left ventricular remodeling in mice.




2.3 肝脏

代表文献 吉凯客户文章Laboratory lnvestigation,2017,97(9):1020

文献来源:Paired related homeobox protein 1 regulates PDGF-induced chemotaxis of hepatic stellate cells in liver fibrosis.




2.4 肺

代表文献 European Respiratory Joumal,2010,36(4):907-914.


文献来源:Overexpression of transforming growth factor-β1 in fetal monkey lung results in prenatal pulmonary fibrosis.




2.5 胰腺

代表文献 Molecular Therapy ,2011,19(1):60-66.


文献来源:Intra-arterial targeted islet-specific expression of Sirt1 protects β cells from streptozotocin-induced apoptosis in mice.


更多部位体内注射参数,点击查看与下载>>

更多体内注射实验操作视频,点击查看与下载>>

引用文献

1. Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing  MAP2K3-p38 Signaling. 2017, Circulation (IF= 18.881). 吉凯产品:过表达腺病毒 研究领域:心力衰竭  首都医科大学附属安贞医院
2. Yes-Associated Protein Promotes Angiogenesis Via Signal Transducer and Activator of Transcription 3 in Endothelial Cells. 2018, Circulation research (IF= 15.211). 吉凯产品:过表达腺病毒 研究领域:血管生成  天津医科大学
3. Transplanted Mesenchymal Stem Cells Reduce Autophagic Flux in Infarcted Hearts via the Exosomal Transfer of mir-125b. 2018, Circulation research(IF= 15.211). 吉凯产品:过表达腺病毒 研究领域:心肌梗死  浙江大学第二附属医院。
4. Deficiency of tumor suppressor NDRG2 leads to attention deficit and hyperactive behavior. 2017, The Journal of Clinical Investigation (IF=13.251). 吉凯产品:过表达腺病毒 研究领域:多动症  空军军医大学(第四军医大学)附属西京医院
5. Nuclear Smad6 promotes gliomagenesis by negatively regulating PIAS3-mediated STAT3 inhibition. 2018, Nature Communications (IF= 12.353). 吉凯产品:过表达腺病毒GV138和干扰慢病毒GV248 研究领域:胶质瘤  南京医科大学无锡人民医院
6. Melatonin-mediated inhibition of Cav3.2 T-type Ca2+ channels induces sensory neuronal hypoexcitability through the novel protein kinase C-eta isoform. 2018, Journal of Pineal Research (IF= 11.613). 吉凯产品:干扰腺病毒 研究领域:神经  苏州大学。
7. Up-regulation of CD81 inhibits cytotrophoblast invasion and mediates maternal endothelial cell dysfunction in preeclampsia. 2017, Proceedings of the National Academy of Sciences (IF= 9.504). 吉凯产品:过表达腺病毒 研究领域:子痫前期发病机制  南京大学医学院附属鼓楼医院
8. MICU1 Alleviates Diabetic Cardiomyopathy Through Mitochondrial Ca2+–Depende. 2017, Diabetes (IF= 7.273). 吉凯产品:过表达腺病毒 研究领域:糖尿病心肌病  空军军医大学(第四军医大学)

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