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淘基因
慢病毒与其他病毒工具比较，具有以下优势：
a. 表达时间长：慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长时间稳定的表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选；
b. 安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T 治疗作用于人体；
c. 免疫原性低： 直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验。
| 病毒表达系统 |
腺病毒 (Adenovirus) |
慢病毒 (Lentivirus) |
腺相关病毒 (Adeno-As sociate virus) |
| 病毒基因组 | 双链DNA病毒 | RNA病毒 | 单链DNA病毒 |
| 复制 | 条件复制 | 不可复制 | 条件复制 |
| 滴度 | 最高可达1012pfu/ml | 最高可达109TU/ml | 最高可达1012-13v.g/ml |
| 感染细胞类型 | 感染分裂和不分裂细胞 | 感染分裂和不分裂细胞 | 感染分裂不旺盛的细胞 |
| 表达丰度 | 高水平表达 | 中到高水平表达 | 高水平表达 |
| 表达时间 | 快(1-2天) | 慢(2-4天) | 1-2周 |
| 持续表达时间 |
病毒基因组游离于宿主基因组外， 瞬时表达外源基因 |
病毒基因组整合于宿主基因组， 长时间、稳定表达外源基因 |
病毒基因组游离于宿主基因组外， 在分裂旺盛的细胞中可长时间表达 |
| 克隆容量 | 适合表达小于5kb的外源片段 | 适合表达小于4kb的外源片段 | 适合表达小于2.8kb的外源片段 |
| 免疫原性 | 较高免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 |
| 安全性 | 可能会引起一些咳嗽流涕 |
暂无发现致病性， 已被用于CAR-T治疗作用于人体 |
暂无发现致病性， 已通过欧盟和FDA许可， 用作基因治疗药物的载体 |
吉凯独有的病毒分级纯化工艺，满足您从永生化细胞到原代和干细胞，从动物体内水平到cGMP细胞治疗等不同实验需求：
A级慢病毒纯化工艺:
通过超速离心初步浓缩慢病毒颗粒，同时去除病毒上清中的血清蛋白和宿主蛋白，大部分质粒DNA和宿主DNA，然后应用超滤，进一步浓缩，去除质粒DNA和宿主DNA，获得高纯度慢病毒产品。
B级慢病毒纯化工艺:
通过切向流过滤系统，在浓缩慢病毒的同时，极大程度地去除DNA残留和蛋白残留，同时通过超滤进一步浓缩和纯化，获得超纯慢病毒产品。
C级慢病毒纯化工艺:
通过阴阳离子交换层析，特异性吸附慢病毒颗粒，然后运用盐离子洗脱，获得可用于临床试验的慢病毒产品。
慢病毒质量检测标准:
FDA和《中国药典》中针对病毒疫苗等制剂提出了病毒滴度（≥2E+8TU/ml），质粒残留（≤4E+8-copy/ml），宿主DNA残留（≤10ng/ml），BSA残留（≤50ng/ml）等产品质量和安全性的纯度要求，同时针对污染和载体安全性，提出了支原体，细菌等微生物安全和RCL的要求。吉凯基因根据中国药典法质量标准，将病毒样品送至专业检测机构，严格测定每一生产批次慢病毒的各项指标。
| 检测项目 | 检测方法 | 检测结果 | 单位 | 参考检测范围 |
| 支原体 | Nest PCR | 阴性 | .. | 阴性 |
| 内毒素 | LAL | 合格 | EU/mI | ≤50 |
| 衣原体 | 培养法 | 阴性 | .. | 阴性 |
| 细菌 | 培养法 | 阴性 | .. | 阴性 |
| 真菌 | 培养法 | 阴性 | .. | 阴性 |
| 活性滴度 | 绝对定量 | 1.00E+08 | TU/mI | ≥1E+8TU |
吉凯病毒质量检测标准
慢病毒鉴定方法：
吉凯基因使用精准的绝对定量qPCR法与GFP荧光计数法检测活性病毒的感染滴度。这两种检测方法直接测定的是插入到细胞基因组的病毒基因组拷贝数，最接近真实滴度。而绝对定量qPCR法更是医疗级病毒产品公认的滴度检测方法，测定滴度更准确，杜绝虚假。
| 检测项目 | 原理 | 优点 | 缺点 |
| GEP荧光计数法 | FACS(流式细胞计数) |
经典方法，重复性好 检测活性病毒的感染滴度 |
对仪器和操作要求高 操作复杂 |
|
绝对定量qPCR法 (DNA定量法) |
病毒感染工具细胞后，抽提整合目的片段的细胞基因组DNA,与标准品比较 |
检测活性病毒的感染滴度 最接近真实滴度 |
对仪器和操作要求高 操作复杂 |
|
RT-qPCR法 ( RNA基因组法) |
病毒梯度稀释感染工具细胞后，抽提RNA,RT-qPCR检测病毒基因组表达 | 检测活性病毒的感染滴度 |
受限于病毒感染后检测 基因的表达丰度 |
|
p24核心蛋白 ELISA定量法 |
利用慢病毒颗粒稳定表达的p24蛋白进行ELISA检测 | 简单，快捷，重复性好 | 反映的是病毒物理颗粒数不是活性滴度 |
市场常见滴度检测方法比较
| 调控方式 | 载体编号 | 元件顺序 | 原核抗性 | 真核抗性 |
荧光标记 启动子 |
荧光标记 |
RNAi/过表达 启动子 |
| 过表达 | GV365 |
Ubi-MCS-3FLAG -CMV-EGFP |
Ampicillin | 无 | CMV | GFP | Ubiquitin |
| GV320 |
Ubi-MCS-3FLAG -SV40-Cherry |
Ampicillin | 天 | SV40 | Cherry | Ubiquitin | |
| GV341 |
Ubi-MCS-3FLAG -SV40-puromycin |
Ampicillin | Puromycin | 无 | 无 | Ubiquitin | |
| GV358 |
Ubi-MCS- 3FLAG -CMV-EGFP |
Ampicillin | Puromycin | SV40 | GFP | Ubiquitin | |
| GV492 |
Ubi-MCS-3FLAG- CBh-gcGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | CBh | GFP | Ubiquitin | |
|
过表达 Tet-on |
GV308 |
TetllP-MCS-3FLAG -Ubi-TetR-IRES -Puromycin |
Ampicillin | Puromycin | 无 | 无 | TtlIP |
| 干扰 | GV112 |
hU6-MCS -CMV- Puromycin |
Ampicillin | Puromycin | 无 | 无 | U6 |
| GV115 |
hU6-MCS-CMV- EGFP |
Ampicillin | 无 | CMV | GFP | U6 | |
| GV248 |
hU6-MCS-Ubiquitin -EGFP-IRES- puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | GFP | U6 | |
| GV298 |
U6-MCS-Ubiquitin -Cherry-IRES- puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | Cherry | U6 | |
| GV493 |
hU6-MCS-CBh- gcGFP-IRES- puromycin |
Ampicillin | Puromycin | CBh | GFP | U6 | |
| 干扰Tet-on | GV307 |
TetlIP-TurboRFP -MCS(MIR30)-Ubi- TetR-IRES -Puromycin |
Ampicillin | Puromycin | TetlIP | RFP | TetlIP |
| miRNA-up | GV369 |
Ubi-MCS-SV40 -EGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | SV40 | GFP | Ubiquitin |
| GV209 |
H1-MCS-CMV -EGFP |
Ampicillin | 无 | CMV | GFP | H1 | |
| GV309 |
hU6-MCS-Ubiquitin -EGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | GFP | U6 | |
| miRNA-down | GV280 |
hU6-MCS-Ubiquitin -EGFP-IRES -puromycin |
Ampicillin | Puromycin | Ubiquitin | GFP | U6 |
| GV234 |
hU6-MCS-CMV -EGFP |
Ampicillin | 无 | CMV | GFP | U6 |
1. 细胞感染
慢病毒可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
2. 在体注射
2.1 神经系统
代表文献 吉凯客户文章Nature medicine，2010.16（12）：1439-1443.
文献来源：Treatment of cerebral ischemia by disrupting ischemia-induced interaction of nNOS with PSD-95.
2.2 心血管系统
代表文献 Circulation,2016：CIRCULATIONAHA,116.017949.
文献来源：Inhibition of aberrant microRNA-133a expression in endothelial cells by statin prevents endothelial dysfunction by targeting GTP cyclohydrolase 1 in vivo.
2.3 肝脏
代表文献 吉凯客户文章 Joumal fo virology, 2016, 90(4): 1729-1740.
文献来源：Hepatitis B virus X protein induces hepatic steatosis by enhancing the expression of liver fatty acid binding protein.
2.4 肺
代表文献 Cell death & disease, 2017, 8(1): e2566.
文献来源：MicroRNA-101 inhibits invasion and angiogenesis through targeting ITGA3 and its systemic delivery inhibits lung metastasis in nasopharyngeal carcinoma.
2. Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling. 2017, Circulation (IF=19.309). 吉凯产品：RNAi慢病毒 研究领域：心脏衰竭 首都医科大学附属北京安贞医院
3. MicroRNA 301A Promotes Intestinal Inflammation and Colitis-Associated Cancer Development by Inhibiting BTG1. 2017, Gastroenterology (IF=18.392). 吉凯产品：microRNA慢病毒 研究领域：小肠和结肠炎症 上海市第十人民医院
4. A Critical Role of Presynaptic Cadherin/Catenin/p140Cap Complexes in Stabilizing Spines and Functional Synapses in the Neocortex. 2017, Neuron (IF=14.024). 吉凯产品：RNAi慢病毒 研究领域：神经 中国科学院神经科学研究所
5. EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling. 2017, Circulation Research (IF=13.965). 吉凯产品：RNAi慢病毒和过表达慢病毒 研究领域：心脏纤维化 浙江大学医学院附属第二医院
6. Aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) opposes hepatocellular carcinoma progression by regulating AMP-activated protein kinase signaling in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凯产品：过表达慢病毒 研究领域：肝癌 第二军医大学
7. PD‐1 Checkpoint Blockade in Combination with an mTOR Inhibitor Restrains Hepatocellular Carcinoma Growth Induced by Hepatoma Cell‐Intrinsic PD‐1. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凯产品：过表达慢病毒 研究领域：肝癌 复旦大学附属中山医院
8. Distinct role of nuclear receptor corepressor 1 regulated de novo fatty acids synthesis in liver regeneration and hepatocarcinogenesis in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凯产品：RNAi慢病毒 研究领域：肝再生和肝癌 第二军医大学
9. SIRT1/HSF1/HSPs Pathway is Essential for Exenatide-alleviated Lipid-induced Hepatic Endoplasmic Reticulum Stress. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凯产品：RNAi慢病毒 研究领域：肝脏内质网应激 中山大学附属第三医院
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