• 外显子捕获可以做CNV吗?

    由于外显子测序有杂交捕获的过程,这样就会涉及捕获效率。各外显子的杂交效率不同,其同源竞争的情况也不同,所以不同的外显子的覆盖率存在差异。一般情况下,外显子测序不能用于CNV的检测,但在癌症研究中,利用癌组织和癌旁组织对照,可以检测somatic CNV。

  • 无参转录组拼接注释后,能得到的注释基因有多少?

    注释基因的多少跟所研究的物种直接相关,如某些比较重要的物种基因研究的比较多,功能也比较清楚,注释得到的基因就会很多;反之则会比较少。

  • 转录组测序的技术重复性很高,那是否还有必要设生物学重复?

    有必要,至少需要两次生物学重复,3次以上的生物学重复更好。2011年7月Hansen发表的文章表明生物学差异是基因自身表达的特性,与检测技术的选择以及数据处理的方式无关。如果不设生物学重复,高影响因子的杂志可能会因此而拒稿。

  • 做转录组测序一般需要测多大的数据量?

    转录组测序所需的测序量随研究目的的不同而有所差异。目前,为保证数据分析结果的可靠性和准确性,吉凯基因推荐对有参考基因组的转录组采用最低6Gb clean data进行后续分析,如果想检测到低丰度的转录本推荐采用10Gb clean data。如果没有参考基因组,需要进行转录本的拼接组装,为了拼接组装的完整性,吉凯基因推荐最低10Gb clean data的转录组测序。

  • 外显子测序的优点是什么?

    外显子测序是全基因重测序的一个较为经济的替代手段,对研究基因的SNP、Indel等具有较大的优势。人的全基因组约3G,外显子占人全部基因序列的1%,而且是关键的1%。重测序一般需要测30X,即90G数据,外显子测序一般测50-100 X,在实现较低成本的前提下对发生突变后最有可能影响功能改变的序列进行针对性的研究,性价比高。
  • 外显子组捕获测序中的捕获特异性(capture specificity)及覆盖度(coverage ratio)分别指什么?

    捕获特异性(capture specificity),指比对到目标区域的有效数据量占总的数据量的比例。捕获效率的高低不影响数据质量,只影响数据的有效比例。特异性越高代表所关注的目标数据的利用率也越高。

    覆盖度(coverage ratio)是目标区域被覆盖到的比率,一般外显子的覆盖度都可以达到95%以上;随着深度的增加,覆盖度也会增加。

  • DNA甲基化测序有哪几种方法?

    目前DNA甲基化测序的主要有WGMS与RRBS,BSAS. WGMS是全基因组、单碱基分辨率、绝对甲基化水平检测的方法,是DNA甲基化检测的金标准。RRBS是简化的、具有代表性的亚硫酸盐测序通过MspI酶切基因组,选取小片段DNA进行亚硫酸盐处理后上机测序。RRBS可以覆盖85%以上的CpG岛和Promoter,这比例仅仅是针对数目。RRBS覆盖某个Promoter区域的5个CG位点,即算覆盖该Promoter。

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