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  • MTT、 MTS、 CCK8的区别?

    MTT

    MTS

    CCK8

    产物是否可以直接用于读数

    否，需加入DMSO

    是

    是

    稳定性（存放时间）

    弱

    偏弱

    强

    操作简便性

    繁琐

    简单

    简单

    灵敏度

    低

    中

    高

    细胞毒性

    强

    强

    弱

    适用细胞类型

    贴壁细胞

    贴壁细胞、悬浮细胞

    贴壁细胞、悬浮细胞

  • Brdu和Edu的区别?

    英文名称

    5-Bromo-2'-Deoxyuridine

    （Brdu）

    5-Ethynyl-2'- Deoxyuridine

    （Edu）

    中文名称

    5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷

    5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷

    实验原理

    可在DNA合成期(S期)取代胸 腺嘧啶插入DNA链，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显 示增殖细胞。

    作为一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增 殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子中，通过乙炔基与小分子荧光叠氮染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性。

    灵敏度

    一般

    较高

    DNA变性

    需要

    不需要

    影响其他标记

    是

    否

    优点

    成本低。

    1.染料是抗体1/500大小，扩散快穿透力强， 无需DNA变性;2.无需抗体，在组织和细胞 水平更准确反映DNA复制活性;3.操作简单，耗时少。

    缺点

    需要抗原抗体反应，抗体孵育等步骤耗时长

    染料容易氧化，需要妥善保管

  • 周期检测有几种方法？

    最经典的是PI-FACS细胞周期检测，通过加入碘化丙啶(Propidium, PI)，荧光标记DNA，利用流式细胞检测荧光标记的DNA含量，用以判断处于不同细胞周期阶段（DNA整倍体数量）的细胞比例。辅助的检测方式还包括Brdu/Edu用于检测处于细胞S期的细胞，qPCR或WB检测细胞周期蛋白复合物的表达

  • 单染和双染凋亡的区别？

    通过Annexin-V染色和PI染色双染色法可以分别对早期凋亡的细胞和晚期凋亡/坏死细胞进行标记，从而对于细胞中早期凋亡，晚期凋亡，坏死细胞的比例进行统计。单染通常是只对Annexin-V进行标记，只关注早期凋亡的是否有改变，文献中两种方法都有用到，只是双染反映的凋亡信息双染会更全一点，需要注意的是如果细胞中转入的载体已经带有荧光，则需要考虑串色的问题，双染不一定有足够的荧光通道。

  • 平板克隆形成与软琼脂克隆形成的区别？

    平板克隆形成

    软琼脂克隆形成

    原理

    将单个细胞放入培养皿内培 养至单个细胞生长增殖并形 成细胞小群

    将单细胞与软琼脂胶混合培养，使细胞处于不贴壁以及单细 胞状态，模拟体内细胞处于半固液态的情况，在此状态下检 测细胞克隆形成和转化的能力

    适用细胞

    大多数贴壁型细胞

    非贴壁生长的细胞

    优点

    成本低、操作简单

    可用于悬浮细胞、更加贴近肿瘤生长的体内环境

    缺点

    只用于贴壁细胞

    成本高、操作步骤复杂、耗时长

  • Transwell实验和transwell侵袭实验的区别？

    Transwell迁移实验是将细胞放在小室上侧进行培养，通过在小室下侧中加入相应生长因子，使细胞从上侧向下侧发生迁移，上侧和下侧之间含有一层8μm孔径的聚碳酸酯膜，因此Transwell实验同时考察了细胞对于细胞因子的趋化性，运动能力，以及穿过聚碳酸酯膜时调整自身形态的能力。transwell侵袭实验是在transwell聚碳酸酯膜上侧加入一层细胞基质，细胞到达下侧需要细胞额外具备分泌降解细胞基质的能力，通常是金属蛋白酶的释放，transwell侵袭实验常用于评价肿瘤细胞侵袭的能力，transwell可以评价大部分细胞的迁移能力。

  • EMT常用marker大全

    表达减少：E-caheren、Desmolakin、Cytokeratin、Occludin

    表达增加：N-cadherin、Vimentin、Fibronectin、Snail1、Snail2、Twist、MMP-2、MMP-3、MMP-9、Integrinv86

    活性增加：ILK、GSK-3β、Rho

    核堆积：β-catenin、Smad2/3、NF-κB、Snail1、Snail2、Twist

  • 不同老师的样本做蛋白组学定量可否放在一组上机？

    有些老师比较了解蛋白组学定量蛋白质组的流程，因此，有此问题。早期的商业服务公司，往往会将不同客户的样本放到一起，如此可以有效的节约成本。但是，我们坚决不会将不同客户的样本混合到一起上质谱。如果客户的样品来自不同物种，那么质谱鉴定的数据库选择会不同，无法进行比较。如果是同一个物种的样品，那么经过不同实验室处理后，样品里的蛋白含量和数目会有较大差别，混在一起后会影响两组不同来源的样品的蛋白鉴定数目。甚至于来源于同一组织的不同细胞系一般也不推荐放在一起上机，因为不同细胞系的蛋白质组差异较大，放在一起上机会影响后续定量。当然单纯从实验技术角度考虑是可以做的，但是后续数据可靠性无法保证，因此这种情况售前一定要沟通清楚。

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