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全基因组过表达文库

基因研究中常需要通过上调靶基因的表达来观察表型变化。过表达(Over-Expression,OE)是上调基因表达最常用的方法,其基本原理是将目的基因的编码区(coding sequence,CDS)构建到质粒或病毒载体中,导入细胞内使基因的表达量增加。根据用途,载体主要分为克隆载体、原核表达载体、真核表达载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、 逆转录病毒载体等。

过表达

过表达如何选择合适的载体呢?

首先我们需要考虑这几个方面:

1. 工具载体的表达时间与实验观察时间是否相符;

2. 工具载体可以容纳的片段大小与目的基因大小是否契合;

3. 工具载体对目的细胞、在体组织的转导是否足够高效。


质粒 慢病毒 腺病毒 腺相关病毒
外源基因表达时间 24h开始表达
持续3-7天
2-4天开始表达
长时间稳定表达
1-2天开始表达
持续7-14天
7-14开始表达
细胞分裂不旺盛部位可长时间表达
插入片段大小 < 5-8kb < 4kb < 5-8kb <2.8kb (包括必须的启动
子以及荧光或者标签元件)
稳定细胞株筛选 可以,但较难操作 可以,外源基因整合于
主基因组,筛选简单
不可以,瞬时表达外源
基因传代后效果减弱
不可以
细胞实验 细胞系,部分细胞
转染效率较低
首选,
广谱,感染效率高
广谱,感染效率高,
适合原代非增殖细胞感染
不适合细胞实验
动物实验 不适合 适合,
根据观察时间
和注射部位选择
较适合(免疫原性高),
根据观察时间和注射部位选择
首选,
根据观察时间和注射部位选择
滴度 最高可达109TU/ml 高达1012pfu/ml 高达1012-13v.g/ml



其次,我们需要了解载体中的每一个元件代表什么。实际应用中,可根据实验目的来挑选合适的载体元件。下面是载体图谱上常见元件介绍:如启动子、荧光标签、抗性、多克隆酶切位点MCS等。


产品介绍

吉凯提供过表达质粒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒AAV等产品。请点击这里查询与购买>>

类别 产品名称 简介 产品规格
质粒 cDNA克隆(现货) 提供无错义、插入、缺失、颠倒、移码突变的CDS模版序列 10ug
过表达质粒 用于过表达编码基因/incRNA 10ug (含等量对照)
慢病毒 过表达慢病毒(现货) 用于过表达编码基因/IncRNA 5E+7TU/1E+8TU
(含等量对照)
过表达慢病毒 用于过表达编码基因/IncRNA 1E+8TU (含等量对照)
过表达慢病毒(Tet-on ) Tet on诱导过表达慢病毒 1E+8TU (含等量对照)
腺病毒 过表达腺病毒(现货) 用于过表达编码基因/IncRNA 2E+10PFU (含等量对照)
过表达腺病毒 用于过表达编码基因/IncRNA 2E+10PFU(含等量对照)
腺相关病毒 工具腺相关病毒(现货) 光遗传、化学遗传、钙指示剂、
荧光示踪、重组酶等108种现货AAV
1E+12v.g.-1E+13v.g
过表达腺相关病毒 用于过表达编码基因/IncRNA 1E+12v.g (含等量对照)

载体选择

吉凯提供用于过表达编码基因和非编码基因的质粒、慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等多种载体。点击查看载体图谱>>

产品类别 载体编号 元件顺序
质粒过表达 GV609 MCS-firefly_ Luciferase
GV608 MCS-firely_ Luciferase
GV486 CMV-left circular frame-MCS-right circular frame-EF1a-copGFP-SV40-Neomycin
GV485 CMV-left circular frame-MCS-right circular frame- SV40-neomycin
GV272 SV40-firefly_ Luciferase-MCS
GV238 MCS-firefly_ Luciferase
GV230 CMV-MCS-EGFP-SV40-Neomycin
慢病毒过表达 GV365 Ubi-MCS-3FL AG-CMV-EGFP
GV320 Ubi-MCS-3FLAG-SV40-Cherry
GV341 Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin
GV358 Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin
GV492 Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES -puromycin
慢病毒过表达Tet-on GV308 TetlP-MCS-3FLAG-Ubi-TetR-IRES-Puromycin
腺病毒过表达 GV345 CMV-MCS-3FLAG-SV40-Cherry
GV314 CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP
腺相关病毒过表达 GV388 CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE-hGH polyA
GV389 CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA
GV410 CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP
GV411 CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA
GV461 CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA
GV467 CMV-betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA
GV489 CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA
GV466 hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA
GV475 hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA
GV488 gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA

引用文献

1. Identification of genomic alterations in oesophageal squamous cell cancer. 2014, Nature (IF= 41.577). 吉凯产品:过表达质粒  研究领域:食管鳞状细胞癌  中国医学科学院

2. The Primate-Specific Gene TMEM14B Marks Outer Radial Glia Cells and Promotes Cortical Expansion and Folding. 2017, Cell stem cell (IF= 23.29). 吉凯产品:过表达质粒  研究领域:神经  中科院生物物理所

3. The metabolic ER stress sensor IRE1α suppresses alternative activation of macrophages and impairs energy expenditure in obesity. 2017, NATURE IMMUNOLOGY (IF=21.506). 吉凯产品:过表达慢病毒  研究领域:能量代谢  中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所

4. Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling. 2017, Circulation (IF= 18.881). 吉凯产品:过表达腺病毒  研究领域:心力衰竭  首都医科大学附属安贞医院

5. Yes-Associated Protein Promotes Angiogenesis Via Signal Transducer and Activator of Transcription 3 in Endothelial Cells. 2018, Circulation research (IF= 15.211). 吉凯产品:过表达腺病毒  研究领域:血管生成  天津医科大学

6. Transplanted Mesenchymal Stem Cells Reduce Autophagic Flux in Infarcted Hearts via the Exosomal Transfer of mir-125b. 2018, Circulation research (IF= 15.211). 吉凯产品:过表达腺病毒  研究领域:心肌梗死  浙江大学第二附属医院

7. EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling. 2017, Circulation Research (IF=13.965). 吉凯产品:RNAi慢病毒和过表达慢病毒  研究领域:心脏纤维化  浙江大学医学院附属第二医院

8. Aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) opposes hepatocellular carcinoma progression by regulating AMP-activated protein kinase signaling in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凯产品:过表达慢病毒  研究领域:肝癌  第二军医大学

9. Deficiency of tumor suppressor NDRG2 leads to attention deficit and hyperactive behavior. 2017, The Journal of Clinical Investigation (IF=13.251). 吉凯产品:过表达腺病毒  研究领域:多动症  空军军医大学(第四军医大学)附属西京医院

10. Gephyrin Palmitoylation in Basolateral Amygdala Mediates the Anxiolytic Action of Benzodiazepine. Biological Psychiatry (IF= 11.982). 吉凯产品:过表达AAV  研究领域:焦虑症  华中科技大学同济医学院

11. Gene deficiency and pharmacological inhibition of caspase-1 confers resilience to chronic social defeat stress via regulating the stability of surface AMPARs. Molecular Psychiatry (IF= 11.64). 吉凯产品:过表达AAV  血清型:AAV1  研究领域:抑郁症。华中科技大学同济医学院

12. Long non-coding RNA H19 contributes to apoptosis of hippocampal neurons by inhibiting let-7b in a rat model of temporal lobe epilepsy. Cell Death and Disease (IF=5.638). 吉凯产品:干扰和过表达AAV  血清型:AAV9  研究领域:颞叶癫痫  首都医科大学

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