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细胞治疗综合服务

CAR-T综合服务

通过CAR病毒构建及CAR-T细胞体外体内功能学实验,完成验证某一肿瘤抗原是否可用于CART细胞治疗靶点的整套临床前研究。

技术原理

CAR-T,全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy,嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。其原理是通过基因工程手段修饰人的T细胞,使其表达嵌合抗原受体(chimeric  antigen recetor, CAR),即将识别肿瘤细胞表面抗原的抗体与激活T细胞所需的信号分子连接,以此增强T细胞对肿瘤的特异性杀伤。回输给病人的CAR-T结合肿瘤细胞表面的靶抗原后,会激活CAR-T细胞增殖及杀伤肿瘤细胞能力。

CAR-T细胞在进行临床试验前需要完成临床前研究,其包含抗原和scFv筛选,CAR病毒载体构建,T细胞转染,靶细胞表面抗原验证,CAR-T细胞体外体内杀伤能力和增殖能力检测等。吉凯基因以“CAR-T细胞免疫治疗技术”的临床转化为目标,可提供CAR-T细胞制备工具(包含scFV筛选及CAR慢病毒构建)、临床前体外细胞实验、临床前体内验证实验等服务,后期可为联合申请临床试验提供技术支持。

结果展示





CART细胞制备从PBMC分离,激活,感染,到扩增检测的流程,前后需要2-3周时间。





噬菌体文库筛选新的scFv以及个性化CAR框设计。





CAR病毒带有GFP元件,感染PBMC细胞后进行流式细胞仪检测GFP阳性细胞的比例情况,显示细胞感染效率为56.1%。





流式细胞仪检测感染CAR病毒的PBMC扩增后CD8+和CD4+ T细胞比例,其中CD8+占比75.9%,CD4+占18.4%。





使用目标抗原的流式抗体对4株靶细胞进行流式检测,结果显示A549和Eca109相对高表达目标抗原。





ELISA检测CAR-T细胞和靶细胞共培养后,细胞上清中多个细胞因子释放量增加。





通过非放射性细胞毒性检测试剂盒检测由于细胞裂解而释放入上清的LDH酶,判断CART细胞对靶细胞的特异杀伤。CART细胞:靶细胞比例为30:1共培养4hr后,靶细胞裂解率为55%。





CART注射入小鼠体内后,细胞因子分泌增加,瘤体明显萎缩/生长变缓,小鼠生存期改善,证明CART在裸鼠体内具有 杀伤活性,同时CAR拷贝数随天数增加,表明CART细胞在体内具有扩增能力。

参考文献

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