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平板克隆形成

待细胞形成单克隆后染色计数,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力做定量分析,了解细胞的增殖能力和独立生存能力,平板克隆形成可用于检测贴壁细胞。

技术原理

克隆形成是测定细胞增殖能力的有效方法之一。单个细胞在体外持续6代以上,其后代所组成的细胞群称为克隆。这时每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3-1.0 mm之间,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力做定量分析,了解细胞的增殖能力和独立生存能力。常用的方法有:平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。悬浮细胞克隆形成检测可使用软琼脂克隆形成实验。

结果展示

用待研基因shRNA慢病毒感染AGS细胞,3天后收集细胞,以600/孔接种6孔板,持续培养2周时间,待细胞形成单克隆后染色计数,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,细胞单克隆数量显著减少,表明待研基因与AGS细胞克隆形成能力及增殖显著相关。

参考文献

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2.Sun R. etal. Down regulation of Thrombospondin2 predicts poor prognosis inpatients with gastric cancer. Mol Cancer. 2014, 13:225.

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