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TUNEL检测


TUNEL是一种经典的细胞凋亡检测方法,凋亡细胞会发生DNA双链断裂,从而在断裂处暴露出3’-OH基团,利用荧光/化学基团标记的dUTP3’OH基团结合后,可通过荧光成像/染色反应指示凋亡细胞。



技术原理:

细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

结果展示:

用待研基因shRNA慢病毒感染A549细胞,TUNEL染色,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,凋亡细胞显著增多,表明待研基因与A549细胞凋亡显著相关。

参考文献:

1.Wyllie, A. H. etal. (1980) Cell death: the significance of apoptosis. Int Rev Cytol.1980;68:251-306.

2.gorczyca, w. etal. (1993)Induction of DNA strand breaks associated withapoptosis during treatment of leukemias. leukemia 7, 659-670.

3.Gold, R. etal. (1994);Differentiation between cellular apoptosis and necrosis bythe combined use of in situ tailing and nick translation techniques.Lab. Invest. 71,219.

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