流式细胞凋亡检测

吉凯基因可根据客户选择或细胞外源表达的荧光类型,相应提供Annexin V单染或Annexin V & PI双染凋亡检测,满足不同的实验需求。

技术原理

正常细胞中,磷酯酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型细胞的PS都会外翻到细胞表面,暴露在细胞膜外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白,具有易于结合磷脂类的特性,对PS有高度的亲和性,因此,Annexin V标记上荧光素可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS,从而检测处于早期凋亡的细胞。
PS 外翻不是早期凋亡细胞独有,也发生在中、晚期凋亡和坏死细胞中。但早期凋亡细胞的细胞膜是完好的,而中、晚凋和坏死细胞的细胞膜完整性已经丧失。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

结果展示


用待研基因shRNA慢病毒感染A549细胞,5天后收集细胞,用APC标记的Annexin Ⅴ染色,经流式细胞仪(Millipore,Guava easyCyte HT)检测,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,凋亡细胞显著增多,表明待研基因与A549细胞凋亡显著相关。

参考文献

Yuliang Pan, Wenqian Shan, Heting Fang, et,al. Sensitive and visible detection of apoptotic cells on Annexin-V modified substrate using aminophenylboronic acid modified gold nanoparticles (APBA-GNPs) labeling. Biosensors and Bioelectronics.2014, 52:62-68.

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