Transwell(ECM)

在Transwell小室间增加基质胶(ECM),细胞进入下室需要先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解。计数进入下室的细胞量可反映细胞的侵袭能力

技术原理

细胞运动性的研究,尤其是在肿瘤细胞的侵袭转移中应用很广泛。肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,在肿瘤转移过程中的某些阶段,肿瘤细胞表现出较强的运动能力,如肿瘤细胞从原发瘤灶分离,进而侵入到邻近组织及再穿过血管壁进入血液循环和穿出血管壁进入继发部位等,因而细胞运动性的研究在弄清肿瘤细胞侵袭和转移的机制上有重要地位。

肿瘤运动性的研究方法主要是体外检测肿瘤细胞主动移行的能力,一般有划痕实验、诱导转移(Transwell)实验等。

吉凯基因提供的Transwell实验,使用Corning转移实验试剂盒,其transwell小室是由24孔组织培养板和12孔细胞培养嵌入物组成,嵌入物(即小室)底层含有8 µm孔径大小的聚碳酸酯膜。实验时,上室为无血清细胞悬液,下室为含血清的培养基,血清中某些成分如一些细胞因子,对细胞生长来说是必不可少,因此细胞对这些因子具有趋向性,利用细胞的这种趋性促使细胞向下室转移,细胞发生迁移后会黏附于聚碳酸酯膜底部,以聚碳酸酯膜底部细胞数量来显示细胞转移能力,不同细胞在此会显示不同的运动转移能力。

结果展示


用待研基因shRNA慢病毒感染MDA-MB-231细胞,3天后收集细胞并接种至Transwell小室中,细胞在Transwell小室中孵育18小时后,取出小室,染色并拍照计数,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,侵袭的MDA-MB-231细胞显著减少,表明MDA-MB-231细胞侵袭能力显著下降,待研基因与MDA-MB-231细胞侵袭显著相关。

参考文献

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