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流式细胞周期检测

通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态,从而计算出各时相的百分率。

技术原理:

细胞周期(cell cycle):是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2/M期组成。G0/G1期:二倍体细胞的DNA含量(2N)。S期:DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。G2/M期:DNA复制结束成为4倍体(4N)。

碘化丙啶(Propidium, PI)为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA或RNA双链螺旋的碱基之间,产生红色荧光,并且荧光强度和所嵌入的核酸含量成正比。细胞周期检测时,首先用RNA 酶将RNA消化排除影响,通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态,从而计算出各时相的百分率。

结果展示:


用待研基因shRNA慢病毒感染U-2OS细胞,5天后收集细胞,PI染色,经流式细胞仪(Millipore,Guava easyCyte HT)检测,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,G1期细胞减少(P<0.05), G2期细胞增多(P<0.05),表明待研基因与U-2OS细胞周期显著相关。

参考文献:

Krishan, A. (1975) Rapid flow cytofluormetric analysis of mammalian cells by propidium iodide staining. J. Cell. Biol. 66: pp. 188-193

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