返回

MTT MTS CCK8

反映细胞增殖情况;通常连续检测5天,获得细胞增殖曲线;检测细胞增殖最经济常用的方法,MTT只适用于贴壁细胞,MTS/CCK8可用于悬浮细胞。

技术原理

活细胞特别是增殖期细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT(即黄色噻唑兰)还原成难溶于水的蓝紫色针状Formazan结晶并沉淀在细胞中,且Formazan的形成量与细胞活力成正比,二甲基亚砜(DMSO)能够溶解Formazan结晶,用酶标仪在特定波长处测定其吸收值,即可间接反映细胞增殖情况。MTS及WST–8(CCK-8试剂)都是新型唑类化合物,和MTT一样,同样都能被细胞线粒体中的脱氢酶还原,MTS及WST–8被还原后的Formazan化合物具有高度水溶性,无需再用加DMSO,可直接用酶标仪在特定波长处测定吸收值。

因还原生成的甲臜物数量与活细胞的数量成正比,MTT、MTS、CCK-8均可用于细胞增殖的检测,目前被广泛应用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

结果展示

为研究某基因是否是某肿瘤细胞增殖相关的关键基因,可将目的基因shRNA慢病毒感染靶细胞,使靶细胞内源表达的目的基因表达下调,随后用MTT进行检测,观察目的基因表达下调后的细胞与对照细胞相比细胞增殖的变化,从而推断结论。


MTT 实验结果图


用待研基因shRNA慢病毒感染A375细胞,3天后收集细胞,按2000/孔的细胞数量接种细胞至96孔板,第二天待细胞贴壁后,开始进行MTT检测,连续检测5天,获得细胞增殖曲线。结果显示,shRNA下调目的基因表达后,细胞增殖显著减缓,表明待研基因与A375细胞增殖显著相关。

参考文献

Suventha Moodley,Neil A. Koorbanally,Thrineshen Moodley.The 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay is a rapid, cheap, screening test for the in vitro anti-tuberculous activity of chalcones. Journal of Microbiological Methods. 2014,104:72–78.

联系我们
客户支持
学术交流
联系我们 客户支持 吉凯商城