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BrdU EdU

可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗BrdU单克隆抗体,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。

技术原理

溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine, BrdU)是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物,可竞争性掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶,利用抗体连接酶或荧光素作为指示系统标记BrdU,当处于旺盛分裂的细胞掺入BrdU后,即可检测出含有BrdU的细胞,并以此判断细胞的数目。固相包被细胞的微孔中加入BrdU抗体,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的BrdU呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过OD值的高低,反映正在合成DNA细胞数的多少,从而反映正处于增殖状态的细胞量。

结果展示

用待研基因shRNA慢病毒感染T24细胞,3天后收集细胞接种96孔板,待细胞贴壁后第一天和第四天进行Brdu检测,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,细胞增殖显著减缓,表明待研基因与T24细胞增殖显著相关。

参考文献

P. Thored, A. Arvidsson, E. Cacci, H,et al,. Persistent production of neurons from adult brain stem cells during recovery after stroke. Stem Cells.2006, 24: 739-747.

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