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RNA水平研究

CO-IP

利用抗原抗议反应,验证两种蛋白在细胞内是否结合,通常同于直接互作机制的研究。

技术原理

以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白相互作用的经典方法。是确定两种蛋白在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。

结果展示

利用包含FLAG-GeneB的质粒进行293T细胞株转染后,3天后裂解细胞抽提蛋白,用anti-FLAG的抗体进行免疫沉淀后,WB检测到免疫沉淀的蛋白中含有Gene A表达的蛋白。

参考文献

Rosenberg, Ian (2005). Protein analysis and purification: benchtop techniques. Springer. p. 520.

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