RNA水平研究

免疫组化

利用抗原抗体反应和酶底物显色处理后,检测石蜡切片上目的抗原表达强度和细胞定位。

技术原理

免疫组化基于利用放射性核素和其他标记物(荧光素,酶,重金属离子等)作为示踪剂, 通过免疫亲和(抗原-抗体特异性结合)途径,在组织切片上,原位显示生物大分子的变化而建立的一门染色技术,常用于蛋白物质的定性、定位检测。 

常见问题

Q:无染色或染色弱?


A:  1.切片过于陈旧,使用新鲜的切片;如果需要进行保存,保存在4°C;

     2.玻片上的组织已干化重新补充水分并在染色过程中保持组织被覆盖在缓冲液中;

     3.抗原表达太少,可更换效价比更高的抗体。


Q:染色后背景值较高?

A:  1. 洗涤不充分,由于固定剂的残留而导致高的背景值,应确保在步骤之间用PBS至少洗3次;

     2. 固定不充分可能会导致抗原在组织中的扩散,可降低固定后时间;

     3. 弥散染色,常由组织损伤导致,小心制备组织样品以避免组织损伤;

     4. 检测试剂的渗透不充分,制备更薄的切片;

     5. 不同固定剂对于组织抗原影响各异,可优化pH,孵育时间和温度。

结果展示

参考文献

Ting Li, Hanqing Guo et.al. Gastric Cancer Cell Proliferation and Survival Is Enabled by a Cyclophilin B/STAT3/miR-520d-5p Signaling Feedback Loop. Cancer Res. 2017 Mar 1;77(5):1227-1240.

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