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RNA水平研究

流式检测

荧光标记抗体孵育细胞后,利用流式细胞检测仪比较不同条件处理的实验组之间细胞表面蛋白的表达差异,是检测膜蛋白表达的首选,吉凯提供多达4色标记检测。

技术原理

细胞表面分子抗原的流式荧光检测是最常用的流式细胞分析方法之一,使用目的蛋白的荧光抗体标记目的细胞,通过流式细胞仪来检测有荧光信号的细胞,从而分析和判断待测细胞群体中目的蛋白表达阳性率。比较不同条件处理的实验组之间,细胞表面蛋白的表达差异。

常见问题

Q:流式细胞检测与western的区别?


A: (1Western可以检测多种类型蛋白,但流式主要适合检测膜蛋白,且抗体通常是直接和荧光基团相连;

  (2)Western测蛋白含量对抗体的量需要很少,一般1:1000左右,而流式对抗体的需要量很大,一般1:50 ;

  (3)流式细胞检测可以知道表达目的抗原的细胞占比情况,Western Blot只能比较样本间目的抗原平均表达情况。

结果展示

目的细胞按实验设计组别进行药物处理后,收集细胞悬液,离心,用缓冲液洗涤,加细胞染色缓冲液重悬后,用PE标记的CD11b抗体进行染色,染色结束后,用细胞染色缓冲液洗涤、重悬,进行流式仪检测 (Millipore,Guava easyCyte HT),分析各实验组别中CD11b 阳性细胞百分比差异。

参考文献

Fukusumi T, et al. CD10 as a novel marker of therapeutic resistance and cancer stem cells in head and neck squamous cell carcinoma. Br J Cancer. 2014 Jul 29;111(3):506-14.

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