RNA水平研究

ELISA

利用抗原抗体反应,检测样本中目的蛋白的浓度,常用于分泌蛋白的检测;可通过同批检测标准品,定量计算得到各实验组目的蛋白含量。

技术原理

ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体─聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证实验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。


吉凯基因提供基于商品化试剂盒的ELISA实验服务。大部分试剂盒采用ELISA双抗体夹心法检测样本中目的蛋白的浓度,即目的蛋白捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的目的蛋白会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗目的蛋白抗体后,两者结合形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在目的蛋白将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,目的蛋白浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中目的蛋白浓度。

结果展示

测蛋白ELISA试剂盒对待测各组样品进行ELISA检测,通过同批检测的标准品,制作出检测OD值与蛋白量的标准曲线,根据待测样品ELISA测得的OD值,计算得到各实验组目的蛋白含量。

参考文献

Bellamkonda K, et al. The eicosanoids leukotriene D4 and prostaglandin E2 promote the tumorigenicity of colon cancer-initiating cells in a xenograft mouse model. BMC Cancer. 2016 Jul 7;16:425.

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