RNA水平研究

Western Blot

利用抗原抗体反应,检测样本中目的蛋白表达量;检测基因蛋白表达量最常用的方法,半定量,无法提供基因的细胞定位等信息。

技术原理

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的各蛋白成分。

结果展示


用目的基因shRNA慢病毒感染A549细胞,3天后收集细胞,提取细胞总蛋白,用western blot进行检测,相比对照组,shRNA慢病毒感染后的实验组增殖凋亡相关蛋白表达量改变情况。

参考文献

Burnette WN. (1981). "'Western blotting': electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate—polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A". Analytical Biochemistry. 112 (2): 195–203.

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