RNA水平研究

TMT

TMT(Tandem Mass Tag)是Thermo Fisher Scientific开发的一种多肽体外标记技术。通过对不同样品中的肽段采用不同通道的TMT试剂进行标记,然后进行LC-MS/MS分析,实现样本蛋白组之间的相对定量。

技术流程

TMT技术流程图

技术原理

TMT试剂盒每个通道的报告基团和平衡基团分子量总和是一致的,当肽段用TMT试剂标记后,来源于不同样本的同一序列的肽段的分子结构和分子量仍保持一致,它们在一级质谱中呈现为同一个信号,一起进入二级质谱分析阶段。

二级质谱中TMT试剂的平衡基团丢失,报告基团从肽段上碎裂下来,肽段自身序列也被碎裂。肽段自身的碎片可用来定性分析肽段的序列组成。报告基团的信号强度比值则能代表来源于不同样本的该肽段的含量比值。


TMT技术优势

TMT试剂盒每个通道的报告基团和平衡基团分子量总和是一致的,当肽段用TMT试剂标记后,来源于不同样本的同一序列的肽段的分子结构和分子量仍保持一致,它们在一级质谱中呈现为同一个信号,一起进入二级质谱分析阶段。

因为标记后的肽段可以混合到一起,就可以将混合物一起进行色谱分级,然后再进行质谱分析,这样能有效增加鉴定数目。





吉凯基因TMT技术流程:


吉凯基因TMT优势

a.软硬件先进(仪器为Q Exactive,Q Exactive PLUS和Q Exactive HF-X,软件为PD2.2/Mascot);

b.质控严格(预实验中每个样本都需要进行蛋白质水平和预质谱水平的质检,不合格的样本会给予合理建议。正式实验中对标记效率和仪器状态也进行严格管控,发现不合格则重新开展实验,确保实验数据有效);

c.专业的团队(团队成员经验丰富,能处理几乎所有类型的样本分析);

d.强大的生信分析团队(除GO,KEGG等常规的分析外,还能进行IPA,趋势聚类,蛋白质相互作用以及其他个性化分析)。





吉凯基因TMT成功案例:

参考文献

1.Zeng L, Zhong J, He G, et al. Identification of nucleobindin-2 as a potential biomarker for breast cancer metastasis using iTRAQ-based quantitative proteomic analysis[J]. Journal of Cancer, 2017, 8(15): 3062.

2.Shui W, Xiong Y, Xiao W, et al. Understanding the mechanism of thermotolerance distinct from heat shock response through proteomic analysis of industrial strains of Saccharomyces cerevisiae[J]. Molecular & Cellular Proteomics, 2015, 14(7): 1885-1897.

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