RNA水平研究

qPCR

实时荧光定量PCR通过SYBR Green染料法/Taqman探针法检测目的基因RNA表达量,可用于多个样本间目的基因mRNA的半定量比较。

技术原理

qPCR即实时荧光定量PCR,是一种以SYBR Green染料法/Taqman探针法进行相对定量检测服务,即用已知管家基因做为内参照,根据目的基因和管家基因的相对表达作为定量的最后结果。该技术具有准确度,灵敏度高等特点。

qPCR现已成为一种成熟的mRNA、microRNA、lncRNA等定量手段。其中,Sybr-Green法因为使用方便、价格低廉(相对于Taqman探针法)而被广泛使用。

结果展示

用待研基因shRNA慢病毒感染SMMC-7721细胞,感染72小时后收集细胞进行qPCR检测,结果显示,经shRNA慢病毒感染后,实验组SMMC-7721细胞中目的基因在mRNA水平的表达量受到抑制,shRNA对目的基因mRNA表达水平的敲减效率达到91.0%

参考文献

Kubista M, et al. The real-time polymerase chain reaction. Mol Aspects Med. 2006, 27(2–3): 95–125.

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