眼睛个体小、相对封闭、具备免疫赦免,是基因治疗中非常热门的器官。随着视网膜和视皮层遗传性疾病分子机制研究的不断深入,使用基因治疗某些遗传性眼部疾病(如视网膜色素变性、缺血性视网膜疾病等)已成为可能。目前使用较多的是通过病毒载体介导将治疗基因导入视网膜色素上皮层、视皮层神经元和光感受器等区域,在常见的病毒载体中,腺相关病毒AAV使用较广泛。

工具病毒选择指南

眼部研究如何挑选合适的工具病毒

慢病毒、腺病毒和腺相关病毒(AAV)等都是常用的工具病毒载体,在眼部的研究中该如何选择呢?



1.  慢病毒:慢病毒的优点是可以将靶基因整合入宿主的基因组中持续稳定的表达,引起的免疫反应较为温和且安全性高。
2.  腺病毒:腺病毒的载体容量大于慢病毒和AAV,适合大片段基因的病毒包装。但腺病毒的免疫原性较大,容易引起动物死亡,且在体表达时间短,不适合需要长期观察的研究。
3.  腺相关病毒AAV:AAV具有体积小、滴度高的优势,病毒颗粒可扩散并感染深层组织,同时其还具有免疫原性低、表达时间长的特点,尤其适合眼部注射的动物实验。影响AAV载体在眼部基因转移的因素包括AAV载体的血清型、基因转移途径、组织特异性启动子等。AAV有多种血清型,其中2型、5型、8型、9型等对眼部的趋向性较高。




了解了这些病毒载体在眼部应用中的优势和不足后,需要根据具体的实验需求和基因情况选择合适的病毒载体,吉凯建议您可以从以下这几个方面出发:

1. 工具载体的表达时间与实验观察时间是否相符;

2. 工具载体可以容纳的片段大小与目的基因大小是否契合;

3. 工具载体对目的细胞、在体组织的转导是否足够高效。


吉凯基因总结了常用基因操作工具的选择方法,您可以根据具体实验需求选择合适的病毒载体:

常用基因操作工具选择指南




吉凯小建议:

1.  在基因大小允许的前提下,建议您优先选择AAV。AAV体积小,滴度高,尤其适合眼部病毒注射。且AAV有多种血清型,其中2型、5型、8型、9型等对眼部的趋向性较高。点击了解更多AAV血清型选择小窍门>>


AAV 血清型的趋向性


2.  可使用组织特异性启动子提升靶基因的特异性表达,如视网膜特异性启动子rpe65。吉凯基因提供组织特异性启动子载体的病毒包装服务,点击了解>>

注射方法

工具病毒眼部注射方法

病毒载体介导的眼部基因转移途径依治疗目的不同主要有玻璃体腔注射、视网膜下注射、前房注射、结膜下注射等。下面以角膜下注射为例做详细说明:

1、实验开始前,先将小鼠进行麻醉。
2、然后将小鼠固定在台上,并将眼球部分突出。
3、夹紧小鼠头部,并对其角巩膜缘处进行扎孔。扎孔时,一般选择角膜缘后1mm 位置,注意避开血管。
4、判断是否扎孔成功。
5、扎孔成功后,开始注射病毒。
6、注射时,针尖垂直进入,随后倾斜,缓慢推注。


角膜下病毒注射
(参考文献:Journal of Neuroscience Methods, 2008, 167 (2) :191)


更多部位病毒体内注射操作视频,点击查看>>

用量参考

眼部注射病毒用量参考

以下表格中为吉凯客户应用文献总结(部分)。更多眼部注射病毒注射参数,点击查看与下载>>


1.  腺相关病毒AAV



代表文献 Science,2010,329(5990):413.





2.  慢病毒





3.  腺病毒

引用文献

1. Distinctive Gene Transduction Efficiencies of Commonly Used Viral Vectors in the Retina[J]. Current Eye Research (IF= 2.12).  吉凯产品:AAV-GFP  血清型:AAV2、AAV1  研究领域:视网膜病毒载体转染效率  上海交通大学附属第一人民医院

2. Human melanopsin-AAV2/8 transfection to retina transiently restores visual function in rd1 mice [J]. International Journal of Ophthalmology (IF= 1.166).  吉凯产品:过表达AAV     血清型:AAV2/8  研究领域:AAV2/8对视网膜转染效率研究  第三军医大学西南眼科医院

3. Deacetylation of MnSOD by PARP-regulated SIRT3 protects retinal capillary endothelial cells from hyperglycemia-induced damage[J]. 2016, Biochemical and biophysical research communications (IF= 2.559).  吉凯产品:慢病毒  研究领域:MnSOD去乙酰化对视网膜毛细血管内皮细胞的保护机制研究  上海交通大学附属第一人民医院

4. Ephrin-A4 Is Involved in Retinal Neovascularization by Regulating the VEGF Signaling PathwayEphrin-A4 Is Involved in Retinal Neovascularization[J]. 2012, Investigative ophthalmology & visual science (IF= 3.388).  吉凯产品:慢病毒  研究领域:视网膜血管新生  北京大学人民医院

5. Inhibition of Oxygen-Induced Ischemic Retinal Neovascularization with Adenoviral 15-Lipoxygenase-1 Gene Transfer via Up-Regulation of PPAR-γ and Down-Regulation of VEGFR-2 Expression[J]. 2014, PloS one (IF=2.766 ).  吉凯产品:腺病毒  研究领域:视网膜血管新生  武汉大学人民医院

6. Silencing of S100A4, a metastasis-associated protein, inhibits retinal neovascularization via the downregulation of BDNF in oxygen-induced ischaemic retinopathy[J]. 2016, Eye (IF= 2.478).  吉凯产品:腺病毒  研究领域:视网膜血管新生  武汉大学人民医院

产品

选择载体类型

  • 慢病毒
  • 质粒
  • 腺病毒
  • 腺相关病毒
点击查询
联系我们
客户支持
产品查询
联系我们 客户支持 吉凯商城